Kromasil液相色譜柱在使用前可以做那些準備呢

更新時間：2019-07-24

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　　Kromasil液相色譜柱特別是液相色譜柱的填裝，需要有較高的技巧和熟練的技能。因此，有人甚至將“裝柱”看作是“藝術(shù)加技術(shù)”。但是，只要掌握了一些基本的規(guī)律和方法，任何實驗室都可以填裝出具有較高柱性能的色譜柱。當然，目前大多數(shù)實驗室多是購買商品預填裝柱來滿足分離、分析之需。但是在一些有特殊需要的情況下，或為節(jié)省經(jīng)費，在實驗室中自行填裝液相色譜柱還是可取的。

　　Kromasil液相色譜柱在使用前，進行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。

　　1、樣品的前處理

　　a、使用流動相溶解樣品。

　　b、使用預處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

　　c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

　　2、流動相的配制

　　Kromasil液相色譜柱是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

　　a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

　　b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學反應

　　c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命。

　　d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

　　e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實驗無法進行。

　　f、在流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

　　3、流動相流速的選擇

　　因Kromasil液相色譜柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求柱效，使用流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。

　　當選用流速時，分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。

　　注意：

　　a.含水流動相在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。

　　b.流動相要求使用0.45μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。

　　c.使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。

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